分光光度計是實(shí)驗室常用的精密儀器,在醫院中有著(zhù)廣泛的應用,主要用于測量溶液的濃度。分光光度計屬于計量強制檢定項目,檢定周期應<1年。目前的檢定規程為中華人民共和國國家計量檢定規程“紫外、可見(jiàn)、近紅外分光光度計檢定規程”該規程對自動(dòng)掃描型儀器的檢定方法描述并不多,有些參數不可設置,在此介紹一些檢定技巧。
分光光度計測量原理
分光光度計的基本測量原理是朗伯-比爾定律,意味著(zhù)一定波長(cháng)的單色光通過(guò)溶液時(shí)溶液對光的吸收度與溶液自身的濃度以及液層的厚度成正比。分光光度計通過(guò)光柵或棱鏡來(lái)生成不同波長(cháng)的單色光,通過(guò)待測溶液后,檢測出射光的強度,再經(jīng)過(guò)信號處理,即可得到溶液的吸光度或透射比。通常需測量其中的一項。由于其分光能力很強,其波長(cháng)范圍可以達到數個(gè)nm,甚至更窄,從而提高了分析的靈敏度、準確度和波長(cháng)范圍,使得分光光度計在化學(xué)分析中得到廣泛的應用。
計量中的常見(jiàn)問(wèn)題與使用技巧
波長(cháng)準確度的對比設定值:波長(cháng)準確度的測量在規程中指定了9種標準物質(zhì)可供選擇。由于濾光片使用方便,價(jià)格低廉,成為應用最廣泛的標準物質(zhì)。通常采用氧化鈥濾光片,通過(guò)全波段掃描,找到其吸光度出現波谷的波長(cháng),然后與給定值進(jìn)行比較,可得到波長(cháng)示值誤差的數值。需要說(shuō)明的是,雖然氧化鈥具有固定的參考波長(cháng),但在實(shí)際計算中應選用具有標準物質(zhì)校準資格的機構校準的波長(cháng)為準,并應定期進(jìn)行校正。
濾光片標號的含義:測量雜散光時(shí),需要用到波長(cháng)分別為220 nm、360nm和420nm的截止濾光片。截止濾光片上印有編號,編號的數字×10即為標稱(chēng)測試波長(cháng)。所以應選擇22號、36號和42號截止濾光片。截止濾光片類(lèi)似于一個(gè)高通濾波器,其截止波長(cháng)應分別≥225 nm、365 nm和430nm。同理,干涉濾光片也是以編號數字×10作為標稱(chēng)峰值波長(cháng),中性濾光片以編號數字×10作為標稱(chēng)透射比。