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分光光度計是實(shí)驗室常用的精密儀器，在醫院中有著(zhù)廣泛的應用，主要用于測量溶液的濃度。分光光度計屬于計量強制檢定項目，檢定周期應＜1年。目前的檢定規程為中華人民共和國國家計量檢定規程“紫外、可見(jiàn)、近紅外分光光度計檢定規程”該規程對自動(dòng)掃描型儀器的檢定方法描述并不多，有些參數不可設置，在此介紹一些檢定技巧。
吸收池配套性：分光光度計的吸收池是成對配套，分為玻璃和石英兩種材質(zhì)。由于玻璃吸收紫外光，其適用波長(cháng)為400～2000nm；石英適用波長(cháng)為180～3000 nm。按照檢定規程，配對的吸收池透射比的差值≤0.5%。為保證其配套性，2個(gè)吸收池盡量同時(shí)使用，注意保養。使用時(shí)樣品液應達到2/3的高度，且注意不要溢出。使用完后用蒸餾水清洗同樣的次數，拭鏡紙單向擦干。一般使用1年后吸收池的配套性會(huì )變差，應重新配對。
基線(xiàn)平直度調整：基線(xiàn)平直度是指掃描透射比為100和0時(shí)基線(xiàn)傾斜或彎曲的程度。如果基線(xiàn)的平直性差，就會(huì )使樣品的吸收光譜中各吸收峰之間的比值發(fā)生變化，給定性分析造成錯誤。導致基線(xiàn)不平直的主要原因是儀器的光學(xué)系統失調，兩光束不平衡。如儀器受震動(dòng)，光源位置變動(dòng)等都會(huì )引起光學(xué)系統故障(基線(xiàn)平直度要以吸光度表示)。有些設備對基線(xiàn)平直非常敏感，容易超
出規程標準，因此在進(jìn)行此項測量時(shí)要使機器充分預熱，光譜帶寬設為2 nm，并且在儀器遮光罩關(guān)閉后穩定2min后再進(jìn)行波長(cháng)掃描。
光譜帶寬調整：規程中對噪聲、漂移、最小光譜帶寬和基線(xiàn)平直度幾個(gè)項目的測定需要調整光譜帶寬。光譜帶寬是由狹縫寬度決定，理論上，光柵型儀器當狹縫寬度小于衍射寬度時(shí)，光譜帶寬由衍射寬度決定；當狹縫寬度大于衍射寬度時(shí)，光譜帶寬由狹縫寬度決定。狹縫越小，得到的單色光越純，但光的強度降低。目前有很多儀器為固定光譜帶寬，而規程規定在測量時(shí)設置為2 nm，固定光譜帶寬儀器可不設。事實(shí)上，當光譜帶寬不能設置時(shí)，容易使光電流的噪聲偏大。
掃描速度選擇：進(jìn)行波長(cháng)最大允許誤差的測量時(shí)，需要對氧化鈥濾光片進(jìn)行波長(cháng)掃描。為節省時(shí)間，設定波長(cháng)范圍只需包含所要同標準值對比的波峰波谷即可。首先要對照上一次的檢測報告或儀器說(shuō)明書(shū)明確儀器波長(cháng)重復性，設置使采樣間隔小于波長(cháng)重復性的掃描速度。如果不能設定采樣間隔，則應設定掃描速度＜120 nm/min。進(jìn)行基線(xiàn)平直度測量時(shí)，全波段掃描的速度應選擇采樣間隔為1 nm的速度，若不能設置，則可選擇400～800 nm/min。
波長(cháng)分段與儀器級別：在紫外、可見(jiàn)、近紅外分光光度計檢定規程中，增加了對儀器的工作波長(cháng)及儀器性能級別的劃分。其工作波長(cháng)分為A段、B段和C段。儀器性能從高到低分為4個(gè)級別，即I級、II級、III級、IV級。儀器的每一項計量指標均應根據級別劃分標準。因此，應對照規程在計量證書(shū)中給出每項指標在每個(gè)波段的儀器級別，以方便使用者對儀器性能有更好的判斷。
光學(xué)器件的維護與保養：光學(xué)器件忌灰塵和觸摸，要保證使用環(huán)境的清潔，濾光片使用完后要及時(shí)放回暗盒中。如光學(xué)器件粘有少量灰塵，可用小功率吸塵器處理。當環(huán)境濕度過(guò)大或PM2.5含量過(guò)高，也會(huì )對測量準確度造成影響。分光光度計屬于精密儀器應盡量避免搬動(dòng)，以免造成光路的輕微改變，儀器不用時(shí)應關(guān)閉電源，延長(cháng)其光源壽命。
分光光度計的檢定是一項科學(xué)、嚴謹和細致的工作。由于該儀器是光學(xué)精密儀器，測量結果極易受到濕度、灰塵、振動(dòng)及霉斑等偶然因素的干擾，實(shí)踐中要區分是分光光度計本身的問(wèn)題還是偶然因素導致的誤差等各種問(wèn)題，嚴格遵守檢定規程規定流程和檢測環(huán)境的要求正確使用、保養儀器。同時(shí)，加強對使用人員的培訓也是保證儀器正常運行、測量數據準確可靠的重要途徑。
