北京六一生物科技有限公司
近年來(lái)屢屢出現在食品中非法添加合成色素事件，合成色素日益成為影響食品安全的一個(gè)重要因素。這類(lèi)色素的合成要經(jīng)過(guò)磺化、硝化、鹵化、偶氮化一系列化學(xué)反應， 大多對人體
有一定危害作用， 偶氮類(lèi)合成色素更具有致癌性。我國對于莧菜紅、胭脂紅、誘惑紅、日落黃、檸檬黃、亮藍、靛藍這幾類(lèi)合成色素在食品中的使用有著(zhù)嚴格的限量。誘惑紅是偶氮類(lèi)化合物， 因此準確測定食品中的誘惑紅對于食品安全有著(zhù)重要意義。
目前測定誘惑紅的標準有高效液相色譜法、紫外可見(jiàn)分光光度計法、示波極譜法等。常用的是高效液相色譜法和紫外可見(jiàn)分光光度計法，本文研究?jì)煞N方法的優(yōu)劣，以期找到可以高效準確測定誘惑紅的檢測方法。
主要儀器：
高效液相色譜儀(配有紫外檢測器; 色譜柱: C18 250mm×4.6mm粒度5μm)
紫外可見(jiàn)分光光度計（上海光譜儀器有限公司）
分析天平(精確到 0.0001g) （上海菁海儀器有限公司）
離心機、實(shí)驗室用水均為超純水。
人工合成色素誘惑紅標準溶液，聚酰胺粉，乙醇－氨溶液，甲醇－甲酸溶液，檸檬酸溶液，乙酸，甲醇(色譜純)，乙酸銨。
液相色譜條件：流速: 1.0 mL/min；柱溫:30℃；進(jìn)樣量:10μL；梯度:甲醇20%～35%，3% /min；35%～98%，9%/min；98%～98%，繼續6min；檢測波長(cháng):254nm；流動(dòng)相:甲醇－乙酸銨溶液
(0.02mol/L)。
高效液相色譜法：將水果味糖果粉碎準確稱(chēng)取10g，加30mL乙醇－氨溶液溶解，水浴濃縮至 20 mL，加20%檸檬酸調節pH3.5～4.5，加熱至70℃，加0.8g聚酰胺粉，充分攪拌，用20%檸檬酸調節pH3.5～4.5，加入少量水，使色素完全吸附。3000r/min離心3min。以乙醇－氨溶液解析， 加乙酸中和，定容至 100mL。經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后，吸取10μL進(jìn)樣。
紫外可見(jiàn)分光光度計法：將水果味糖果粉碎準確稱(chēng)取10g，加30mL溫水溶液溶解，用檸檬酸調節至pH4，加0.8g聚酰胺粉，充分攪拌，使色素完全吸附。熱水洗去糖等物質(zhì)。并用甲醇 － 甲酸溶液洗三次，去除天然色素。再用70℃ 水洗至濾液為中性。然后用乙醇－氨溶液將合成色素解析下來(lái)。于水浴上驅除氨，將溶液蒸至2 mL，用50% 的乙醇溶液定容至5mL。
從結果的可信度來(lái)看， 高效液相色譜法加標濃度在300μg/g時(shí)，平均回收率為98.3%，符合《SN/T1743－2006食品中誘惑紅、酸性紅、亮藍、日落黃的含量檢測 高效液相色譜法》中的回收率要求；紫外可見(jiàn)分光光度計法的兩個(gè)相差最大的平行試樣測定結果( 即0.0311和0.285) 的絕對差值是算術(shù)平均值的8.7%符合《GB/T5009.141－2003食品中誘惑紅的測定》的要求。
從精密度來(lái)看， 高效液相色譜法的六個(gè)平行試樣測定結果的 RSD=0.7% ，紫外可見(jiàn)分光光度計法的六個(gè)平行試樣測定結果的 RSD=4.1%，可見(jiàn)此實(shí)驗中高效液相色譜法的精密度明顯高于紫外可見(jiàn)分光光度計法。
從方法的靈敏度來(lái)看，高效液相色譜法的檢出限是2.5mg/kg；紫外可見(jiàn)分光光度計法的取樣量為10g時(shí)，檢出限是25mg/kg?？梢?jiàn)高效液相色譜法的靈敏度明顯低紫外可見(jiàn)分光光度計法。
由上述可以得出，在檢測糖果中合成色素誘惑紅含量時(shí)，高效液相色譜法優(yōu)于紫外可見(jiàn)分光光度計法。
