紫外可見(jiàn)光分光光度計的使用（二）

    分光光度計的使用：在了解基本原理的基礎上，分光光度計的使用主要從以下幾個(gè)方面著(zhù)手：

   光源和波長(cháng)的選擇：根據所測定的物質(zhì)的性質(zhì)，選擇合適的光源和波長(cháng)。一般在可見(jiàn)光范 圍選擇鎢燈，紫外選擇氘燈，但現在也有的紫外可見(jiàn)分光光度計在設計上已取消光源選擇，只要一打開(kāi)機器，兩種光源都打開(kāi)。初學(xué)者常犯的錯誤是忽視波長(cháng)的選擇，教學(xué)中常遇到的事情是學(xué)生把樣品測完了才發(fā)現波長(cháng)選錯了，究其原因是沒(méi)有檢查波長(cháng)設置。因此，在教學(xué)中，我 們經(jīng)常強調使用分光光度計時(shí)，第一步是打開(kāi)電源，第二步就是檢查波長(cháng)。如果是繼續別人后使用儀器，則第一步就是檢查波長(cháng)。

   樣品測定：用于分光光度計測定樣品物質(zhì)含量的基本原理是，樣品在一定波長(cháng)下光吸收值 的大小與樣品中該物質(zhì)濃度成正比。而最好的線(xiàn)性關(guān)系是在光吸收值為0.3 ～0.7時(shí)。因此，測定前要經(jīng)過(guò)預實(shí)驗確定合適的樣品濃度，讓反應后的待測溶液的光吸收值位于這個(gè)范圍內。否則，待測數據不能正確反映實(shí)際變化。學(xué)生常有的一個(gè) 區是光吸收超過(guò)1.0以上時(shí)，將待測液稀釋后測定。 實(shí)驗數據表明，這種做法是不正確的，樣品稀釋?xiě)撛诜磻岸粦诜磻蟆?

   如果不同樣品之間濃度差異較大，則在測定時(shí)應先測定低濃度(淺色 )，再定測高濃度(深色)，這樣可以避免反復洗比色杯。不僅節省時(shí)間，還可以避免洗杯后潤洗所造成的誤差。為 了減少比色杯的光吸收誤差，除了測定前校正比色杯外，可以在測定中平行樣品間使用同一個(gè)比色杯測定。

   當分光光度計使用時(shí)，每次測定樣品時(shí)應先用對照校正零點(diǎn)(機器和光吸收)，然后再將待測樣品拉人光路進(jìn)行測定。 實(shí)際操作時(shí)也可以只校正光吸收零點(diǎn)，當光吸收零點(diǎn)出現較大誤差時(shí)，再全部校正。因為分光光度法是以物質(zhì)光吸收作為設計基礎的，一般測定時(shí)常以蒸餾水等作為參照調正儀器的零點(diǎn)和光吸收的零點(diǎn)。測定樣品得到的光吸收值減去空白管光吸收值，再 去計算含量。 但實(shí)際上，比較以空白管代替蒸餾水管來(lái)調儀器的零點(diǎn)和光吸收零點(diǎn)，所測得的光吸收值和一般操作所測定的光吸收值是一樣的。但這樣做的結果不僅簡(jiǎn)便了實(shí)驗操作，而且 消除了試劑本身的光吸收值。