紫外可見(jiàn)分光光度計測試（二）

    分光光度計的精密度和準確度公認是比較高的,在實(shí)際工作中被廣泛采用,很多分析方法已被制訂成標準方法。分光光度法都可以發(fā)揮作用, 在有機分析中,紫外一可見(jiàn)光譜除可作定量分析外,在定性和結構分析方面,它可作為紅外光譜。核磁共振、質(zhì)譜等方法的輔助手段。

   新儀器在啟用時(shí),必須請計量部門(mén)進(jìn)行全面檢測。但在使用過(guò)程中,也要定期復檢。對各項性能指標逐項進(jìn)行檢查、校正,記錄下原始數據,建立起該儀器的技術(shù)檔案,供定期維護、校正時(shí)查閱。下面逐項介紹一個(gè)紫外可見(jiàn)分光光度計的主要性能指標及其測試方法。

   波長(cháng)重復性：用校正波長(cháng)的標準樣品,在同祥條件下,每隔一定時(shí)間(如1小時(shí))重復測量某一吸收峰位置,求出各次測量值對平均值的相對偏差,相對偏差的平均值表示波長(cháng)的重復性。

   吸光度準確性: 即測光精度, 是指儀器上測得的透光率或吸光度與真實(shí)值之間的偏差,該偏差越小,說(shuō)明數據越準確可靠, 即測光精度就越高。

   檢查測光精度通常是應用標準溶液法。用堿性絡(luò )酸鉀溶液檢查測光精度，其方法是將分析純的鉻酸鉀放入105攝氏度烘箱內烘2小時(shí)使其恒重。取出后放在干燥器中。冷卻半小時(shí)，用分析天平城區0.45g鉻酸鉀，并加入0.05N的氫氧化鉀溶液到1000ml。在25攝氏度用10mm的石英吸收池測定出吸光度。

   吸光度里復性: 在同樣條件下對某一試樣進(jìn)行多次重復測量吸光度,求得各次測量值對平均值的偏差和偏差的平均值。、

   基線(xiàn)的祖定性和平直性: 基線(xiàn)穩定性是指不放置樣品情況下,掃描100%T和O%T線(xiàn)時(shí), 讀數偏離的程度.基線(xiàn)平直性是指不放置樣品時(shí),掃描100%T和0%T,基線(xiàn)傾斜或彎曲的程度。光學(xué)系統失調,二光束不平衡是基線(xiàn)平直性不好的主要原因,儀器搬動(dòng)受震,光源位置移動(dòng)也會(huì )引起基線(xiàn)彎曲。

   光度線(xiàn)性范圍: 儀器的光度線(xiàn)性范圍,也就是儀器最佳工作范圍。在此線(xiàn)性范圍內測得的物質(zhì)的吸光系數才是一個(gè)常數,老式的分光光度計的光度線(xiàn)性范圍一般是在0.1-1.2( 吸光度)之間,現代的儀器遠遠超出了這個(gè)范圍。

   光度線(xiàn)性范圍的檢查法是將物質(zhì)(例如重鉻酸鉀等) 配成一系列不同的濃度,測定吸光度, 根據測得的吸光度計算吸光系數,以吸光度A為橫坐標,相應的吸光系數為縱坐標繪制吸光系數一吸光度曲線(xiàn),曲線(xiàn)上的平坦區域即為儀器的線(xiàn)性范圍。

   分辨率: 紫外可見(jiàn)分光光度計的的分辨率是指儀器對于緊密相鄰的峰(吸收或發(fā)射)可分辨的最小波長(cháng)間隔。是衡量分光光度計性能的重要指標之一它是分光光度計質(zhì)量的綜合反映

。單色器渝出的單色的光潛純度、強度以及檢測器的光譜靈繁度等是影響儀器分講率的主要因素。

   分辨率低有時(shí)會(huì )使相鄰兩峰不能分開(kāi),使定性分析或結構測定造成錯誤。分光光度法的定量分析的基礎是比耳定律。嚴格說(shuō)來(lái),吸光度與濃度成線(xiàn)性關(guān)系只能對單色光而言。

單色性差就會(huì )使定量分析結果產(chǎn)生誤差。對于雙光束紫外及可見(jiàn)分光光度計在260nm處。儀器應能分辨波長(cháng)間隔為0.3nm3 n m 的二條潛線(xiàn)，其檢查法是:

   1、將儀器量程放在0-100%檔

   2、強1-2滴苯液滴入1cm石英吸收池中，蓋上蓋子，放入樣品室內。

   3、調節100%旋紐,使270nm處的透射率調到90-100%之間,然后掃描258.9nm的一組苯蒸氣的吸收峰。

   4、在記錄紙上觀(guān)察258.9nm的分辨深度,如果A值大于8%,說(shuō)明儀器分辨率優(yōu)于0.3nm。